CRISPR（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）技術(shù)，作為現(xiàn)代生物科學(xué)的一項(xiàng)重要技術(shù)，在基因編輯、疾病模型構(gòu)建等多個(gè)領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。然而，隨著其應(yīng)用范圍的擴(kuò)大，CRISPR實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能遇到的核酸污染問(wèn)題也日益凸顯。

核酸污染，特別是雜質(zhì)DNA和核酸酶的污染，可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生嚴(yán)重影響，甚至導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。因此，清除這些污染成為了CRISPR實(shí)驗(yàn)中不可忽視的一環(huán)。

一、CRISPR實(shí)驗(yàn)中的核酸污染是什么

在CRISPR實(shí)驗(yàn)中，核酸污染主要來(lái)源于兩個(gè)方面：一是實(shí)驗(yàn)過(guò)程中使用的試劑、耗材等可能攜帶的雜質(zhì)DNA；二是實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的核酸酶，如DNA酶和RNA酶等。這些污染物可能會(huì)干擾CRISPR系統(tǒng)的正常功能，導(dǎo)致基因編輯效率低下，甚至產(chǎn)生非預(yù)期的基因修飾。

二、清除核酸污染的策略

選擇高質(zhì)量的試劑和耗材

選擇來(lái)自可靠供應(yīng)商的、經(jīng)過(guò)嚴(yán)格質(zhì)量控制的試劑和耗材，是降低核酸污染風(fēng)險(xiǎn)的第一步。同時(shí)，定期對(duì)試劑和耗材進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)，確保其質(zhì)量和純度符合實(shí)驗(yàn)要求。

嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，應(yīng)嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范，避免交叉污染。例如，在使用移液器時(shí)，應(yīng)避免反復(fù)吸取和釋放液體，以減少核酸污染的風(fēng)險(xiǎn)。此外，還應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)域進(jìn)行定期清潔和消毒，以減少環(huán)境中的核酸污染。

使用DNA/RNA污染清除劑

針對(duì)已經(jīng)產(chǎn)生的核酸污染，可以使用DNA/RNA污染清除劑進(jìn)行清除。這些清除劑可以有效地降解大多數(shù)表面上的擴(kuò)增子、質(zhì)粒或基因組DNA和RNA，以及去除DNA酶和RNA酶。例如，德國(guó)MB公司生產(chǎn)的PCR  Clean™DNA清除噴霧劑就是一種有效的選擇。使用時(shí)，可直接噴灑在需要清潔的物體表面，方便快捷。

引入核酸純化步驟

在CRISPR實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵步驟中，引入核酸純化步驟也可以有效地清除核酸污染。例如，在制備CRISPR-Cas9復(fù)合物時(shí)，可以使用商業(yè)化的核酸純化試劑盒進(jìn)行純化，以確保復(fù)合物的純度和活性。

三、結(jié)論

在CRISPR實(shí)驗(yàn)中，清除核酸污染是確保實(shí)驗(yàn)成功的重要一環(huán)。通過(guò)選擇高質(zhì)量的試劑和耗材、嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范、使用DNA/RNA污染清除劑以及引入核酸純化步驟等措施，可以有效地降低核酸污染的風(fēng)險(xiǎn)，提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。未來(lái)，隨著CRISPR技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，相信我們將能夠更好地應(yīng)對(duì)核酸污染問(wèn)題，推動(dòng)CRISPR技術(shù)在更多領(lǐng)域的應(yīng)用和發(fā)展。