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細胞是否受到細菌污染,可以早知道

更新時間:2020-12-10  |  點擊率:1053

許多時候,都需要無菌環(huán)境,無菌培養(yǎng)。例如細胞在體外培養(yǎng)時,為了保證無菌,有時需要加入抗生素。但長期加抗生素對細胞也不利。一些特殊實驗也需要不含抗生素。有沒有一種方法,可提早知道細胞是否有細菌污染呢?

有些客戶采用了德國Minerva Biolabs生產(chǎn)的細菌檢測試劑盒(英文名:Onar® Bacteria Detection Kit,貨號),它是PCR方法,可快速檢測生物樣品(包括細胞培養(yǎng)物和病毒貯存液)中是否存在細菌。該試劑盒引物針對細菌16s rRNA的高保守區(qū),,可檢測超過45種細菌屬。

該試劑盒中的主要試劑均為凍干粉,性能穩(wěn)定。它包含有:

凍干預混液:含引物/核苷酸/內(nèi)控對照DNA /聚合酶

反應緩沖液

凍干的陽性對照DNA

PCR級水

樣本可以是細胞上清,樣本不用提DNA,但需要熱滅活(95 °C 5分鐘)。

樣本需不含抗生素。如含抗生素,則細胞應在不含抗生素的培養(yǎng)基中再培養(yǎng)至少一代。

細菌陽性擴增片段450 bp左右,內(nèi)控對照擴增片段約140bp。

該試劑盒的檢測限為2.4×10的3次方細菌 /ml。

為避免假陽性,建議使用帶濾芯吸頭。

擴增后跑膠觀察條帶,即可判斷結(jié)果。示意圖如下:

 

 

圖. 內(nèi)控對照顯示PCR反應正常,樣本中無PCR抑制成分。460bp左右存在目的條帶,提示存在細菌污染。

 

該產(chǎn)品有2篇引用文獻,如下:

1. Linow M., (2012). Mastermix 16S – Ultra Sensitive Detection of Microbial DNA. Research in Molecular Diagnostics, No. 2/12.

 

2. Simonsen Ø. et al., (2015). Characterization of the exte nt of a large outbreak of Legionnaires‘ disease by serological assays. BMC Infectious Diseases, 15:163. doi: 10.1186/s12879-015-0903-2.

 

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