总裁把她的乳尖都吸大了,国产亚洲精品久久久久久,日久精品不卡一区二区,再深点灬舒服灬太大了少妇

當(dāng)前位置:首頁(yè)  >  技術(shù)文章  >  qPCR檢測(cè)支原體方法略述

qPCR檢測(cè)支原體方法略述

更新時(shí)間:2020-11-09  |  點(diǎn)擊率:837

和PCR比起來(lái),qPCR不用跑膠,實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增狀況,操作更為便捷。下面以德國(guó)MB Venor®GeM支原體檢測(cè)試劑盒(qPCR一步法)Venor®GeM qOneStep)為例,略述檢測(cè)原理和過(guò)程。

 

   該試劑盒包括4管試劑,其中2管分別為緩沖液和PCR水,另2管為主要試劑。1管即mix,含引物、核苷酸、聚合酶、熒光素標(biāo)記的探針和內(nèi)部擴(kuò)增對(duì)照。另1管為陽(yáng)性對(duì)照,均為凍干粉。

 

它通過(guò)擴(kuò)增高度保守的rRNA操縱子,或者更準(zhǔn)確地說(shuō),擴(kuò)增支原體基因組中的16S rRNA編碼區(qū),可以特異性地檢測(cè)支原體。在520nm(FAMTM通道)檢測(cè)支原體特異性擴(kuò)增片段。在610nm(HEXTM通道)檢測(cè)內(nèi)部擴(kuò)增對(duì)照的擴(kuò)增。它能特異性檢測(cè)所有導(dǎo)致細(xì)胞污染的柔膜體物種。真核DNA不會(huì)被擴(kuò)增。通過(guò)內(nèi)部對(duì)照,可檢測(cè)PCR抑制劑的存在或不正確的DNA提取引起的假陰性結(jié)果。樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清液。檢測(cè)程序可在3小時(shí)內(nèi)完成。

在檢測(cè)前,樣本需要一定的制備。具體是將100μl細(xì)胞培養(yǎng)上清液轉(zhuǎn)移至無(wú)菌的1.5 ml反應(yīng)管中。關(guān)上蓋子扣緊。將樣品在95°C下孵育5分鐘。以大速度短暫離心樣品(15秒)以沉淀任何細(xì)胞碎片。然后可直接取2μl上清液進(jìn)行qPCR。

 

qPCR反應(yīng)體系一共是25ul,其中樣本2ul,其余是master mix。注意設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照(無(wú)模板對(duì)照)。

 

如果檢測(cè)的Ct<40,則表明PCR結(jié)果陽(yáng)性。如果檢測(cè)的Ct≥40,則PCR反應(yīng)結(jié)果為陰性。如果FAM陽(yáng)性,則支原體陽(yáng)性。如果FAM陰性,HEX也陰性,表明PCR擴(kuò)增出了問(wèn)題,需要重做。如果FAM陰性,HEX陽(yáng)性,表明支原體確實(shí)陰性。

 

PCR擴(kuò)增出了問(wèn)題主要原因?yàn)镻CR反應(yīng)被抑制了,可能需要考慮做DNA抽提。

 

在qPCR反應(yīng)中,引物和探針的設(shè)計(jì)尤為重要,它既需要覆蓋大多數(shù)支原體,又需要不與細(xì)菌和哺乳動(dòng)物細(xì)胞DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。當(dāng)然,Taq酶的性能也很重要,因?yàn)镈NA的擴(kuò)增終依賴(lài)于酶的活性和擴(kuò)增的速度。從這個(gè)角度說(shuō),一個(gè)好的qPCR試劑盒是各個(gè)因素共同作用的結(jié)果。

韩国年轻漂亮岳每4乱理| 老熟女高潮喷水了| 女人爽到高潮30分钟一次正常吗| a级a片少妇高潮喷水片| 欧美又大又色又爽aaaa片| 东京热av人妻无码a片| 日本真人边吃奶边做爽免费视频| 99久久精品费精品蜜臀av| 久久av喷吹av高潮av欧美| 女人10处有痣是富贵痣| 女人与公驹交酡全过程| 国产精品久久久久无码av色戒| 婷婷亚洲五月色综合久久| 最近中文字幕视频高清| 国产av一区二区三区日韩| 富豪们的玩物np全肉小说| 舌头伸进去添的我爽高潮| 年轻教师6电影完整版| 好男人在线社区www在线影院| 放荡少妇交换超级乱| 18videosex性欧美69| 曰本女人与公guo交酡视频a片| 善良的嫂子在线观看| 吃奶一边吃一边流下来是什么原因 | 国产熟妇另类久久久久| 国产成人av| 成人h动漫精品一区二区| 色琪琪女色窝77777| av无码一区二区三区| 国产偷人爽久久久久久老妇app| 阿娇被躁120分钟视频| 亚洲国产精品久久久久久| 无码性午夜视频在线观看| 色欲av无码一区二区三区| 自己撅起来乖乖挨c烂h| 国产女人18毛片水真多18精品| 国产女人高潮叫床男人桶到爽| 亚洲日本va中文字幕无码 | 国产成人精品三级麻豆| 西西大胆国模人体艺| 日本人xxxxxxxxx69|