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Vero細胞的無血清培養(yǎng)

更新時間:2018-12-11  |  點擊率:1220

Vero細胞是日本學(xué)者Yasumura等于1962年從正常成年非洲綠猴腎分離獲得的貼附依賴性細胞系,Vero一詞由世界語中的verde(意為綠色的)和reno(意為腎臟的)兩個詞合并而成。Vero細胞是世界衛(wèi)生組織和我國生物制品規(guī)程認可的疫苗生產(chǎn)細胞系。

 

與用作疫苗生產(chǎn)的原代細胞、二倍體細胞和其他一些傳代細胞基質(zhì)相比,Vero細胞具有以下特點:

①來源方便,連續(xù)傳代,生長速度快;

②對多種病毒的感染敏感、病毒增殖滴度高;

③遺傳性狀穩(wěn)定,惡性轉(zhuǎn)化程度低,生物安全性較高;

④培養(yǎng)條件要求不苛刻,易于在生物反應(yīng)器實施大規(guī)模培養(yǎng)。

疫苗的接種對象主要是大范圍的健康人群,其質(zhì)量和安全性一直是備受關(guān)注的問題。

 

疫苗的質(zhì)量和安全性在很大程度上取決于疫苗的生產(chǎn)方式和過程。血清是一種組分復(fù)雜而尚不*明確的混合物,至少含有1000種不同的蛋白質(zhì),總蛋白量高達60~150g/L,它能為細胞的體外培養(yǎng)提供必要的生長因激素、細胞貼附因子和營養(yǎng)成分。受Vero細胞自身的貼附依賴生長特性和動物細胞培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展進程的影響,本世紀之前的Vero細胞培養(yǎng)及病毒疫苗生產(chǎn)均存在著對血清的依賴。

 

 

血清組分的復(fù)雜性和不確定性,以及其中存在病毒等病原微生物污染的潛在風(fēng)險,影響著病毒疫苗的生產(chǎn)工藝和疫苗質(zhì)量。從病毒疫苗生產(chǎn)工藝角度考慮,血清組分的復(fù)雜性和批次間的質(zhì)量差異增加了病毒疫苗生產(chǎn)的不穩(wěn)定性和產(chǎn)品質(zhì)量控制的難度;從病毒疫苗的安全性角度考慮,血清中潛在的病原微生物,如引起牛海綿狀腦炎的朊病毒,給疫苗的使用帶來了不容忽視的安全隱患。

 

由血清使用所造成的細胞培養(yǎng)過程和細胞表達產(chǎn)物安全性的不確定因素增加的現(xiàn)實問題,成為動物細胞無血清培養(yǎng)技術(shù)研究和應(yīng)用的發(fā)展動因。隨著動物細胞無血清培養(yǎng)技術(shù)的不斷進步,為包括Vero細胞在內(nèi)的動物細胞大規(guī)模無血清培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用提供了必要的技術(shù)支撐,無血清培養(yǎng)已成為包括疫苗在內(nèi)的生物技術(shù)藥物生產(chǎn)的總趨勢。2010年,美國、歐盟和日本等發(fā)達國家將全面停止在生物制藥中應(yīng)用血清,F(xiàn)DA將停止含血清細胞培養(yǎng)工藝生產(chǎn)的生物技術(shù)新藥的申報受理。

 

上HiMedia公司生產(chǎn)的SFRE199-1培養(yǎng)基是病毒生產(chǎn)細胞培養(yǎng)基M199的改良型。SFRE199分為I型和II型,即SFRE199-1和SFRE199-2。和M199相比,SFRE199顯著升高了8種氨基酸的濃度,包括精氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸,也升高了葡萄糖的濃度,使能獲得較好的細胞生長而不表現(xiàn)出毒性。

 

另外,加入了硫酸鋅、丙酮酸鈉和胰島素,降低了硝酸鐵、黃嘌呤和碳酸氫鈉的濃度,還添加了半乳糖,以避免乳酸過度積累,并使細胞在維持的延長期內(nèi),pH值保持在生理范圍。

 

國外有研究表明,SFRE 199-1可作為無血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ)成分,用于Vero細胞的培養(yǎng),并在Vero細胞靜置培養(yǎng)中,以SFRE199-1為基礎(chǔ)的無血清培養(yǎng)基可獲得較好的細胞生長效果。

 

Vero細胞無血清培養(yǎng)基的優(yōu)化主要涉及以下兩方面。其一,從提高病毒疫苗安全性的需要出發(fā),以非動物來源成分替代動物來源成分、化學(xué)組分明確成分替代化學(xué)組分不確定成分;其二,從提高病毒疫苗生產(chǎn)效率的目的考慮,根據(jù)細胞生長和代謝動力學(xué)特征優(yōu)化培養(yǎng)基的組成。

 

但無血清培養(yǎng)也存在一定不足,如:

①目前多數(shù)無血清培養(yǎng)基的通用性較低,應(yīng)用不廣泛,不具有普遍性;

②目前低血清培養(yǎng)基研究開發(fā)的相關(guān)數(shù)據(jù)缺乏在線交流,可查閱的資料有限,不能有效促進細胞馴化技術(shù)的發(fā)展;

③無血清培養(yǎng)基的制作成本較高,不利于商業(yè)化開發(fā)與應(yīng)用;

④細胞在無血清培養(yǎng)基中,對外界條件如物理和化學(xué)等因素的改變較敏感,等。

 

締一生物作為HiMedia公司在中國的代理商,在細胞培養(yǎng)、微生物培養(yǎng)和檢測領(lǐng)域,一如既往地為您帶來的服務(wù)。

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